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哺乳動(dòng)物細(xì)胞核移植 ( 克隆 ) 的基本技術(shù)程序(四)

來(lái)源:動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)布時(shí)間:2015-03-30 09:26:59

3. 胚胎干細(xì)胞作為核供體
ES 細(xì)胞是早期胚胎細(xì)胞或囊胚內(nèi)細(xì)胞團(tuán)細(xì)胞經(jīng)抑制分化后培養(yǎng)而篩選出來(lái)的一類(lèi)全能細(xì)胞,這種細(xì)胞具有正常的二倍體核型,它既可以在特定條件下進(jìn)行無(wú)限增殖而不發(fā)生分,又可以在特定條件下分化為包括生殖系在內(nèi)的各種細(xì)胞和組織(Evans and kaufman,1981)。迄今,在小鼠和人已培養(yǎng)建立胚胎干細(xì)胞系。此外,將 PGCs從胎兒的原生殖脊分離 來(lái)進(jìn)行培養(yǎng),也可以形成在功能和形態(tài)上與 ES 細(xì)胞相同的細(xì)胞系。ES 細(xì)胞具有體外發(fā)育全能性,并且可以在體外無(wú)限傳代,因此它是動(dòng)物克隆的理想供體細(xì)胞。ES細(xì)胞作為核移供體細(xì)胞與體細(xì)胞的制備方法類(lèi)似,亦需進(jìn)行細(xì)胞周期的調(diào)控。
供體細(xì)胞一般均為活的細(xì)胞。但最近Loi等(2002)的研究發(fā)現(xiàn),綿羊物理變性的體細(xì)胞 移植到受體卵母細(xì)胞后,亦能重新激活發(fā)育到囊胚階段,并獲得克隆綿羊。由此表明,體細(xì)克隆的必要成分是供體細(xì)胞的細(xì)胞核DNA,而非染色體蛋白和功能性的中心粒。這一研究結(jié)果提示,供體細(xì)胞可以通過(guò)凍干保存,使得供體細(xì)胞的保存運(yùn)輸更為簡(jiǎn)單方便。