( 五 ) 重構(gòu)胚的激活
核移胚的正常發(fā)育有賴于卵母細(xì)胞的充分激活,低的核移胚發(fā)育率可能與卵母細(xì)胞未充激活有關(guān)。在核移植操作中,常用電脈沖誘導(dǎo)供體細(xì)胞與受體卵母細(xì)胞間的融合與激活。這種電激活方法不能引起重組胚產(chǎn)生像受精時精子所誘導(dǎo)的所有反應(yīng)。Wakayama 等（1998)采用電融合后再用化學(xué)試劑(乙醇、鈣離子載體等)激活處理的方法,可明顯提高核移植胚胎的發(fā)育率。
通過近年來的大量研究,下列 4 種方法均能有效地激活各個成熟階段的卵母細(xì)胞 : ①鈣離子載體結(jié)合電激、放線菌酮和細(xì)胞松弛素處理。②乙醇結(jié)合放線菌酮和細(xì)胞松弛素處理。③ 離子霉素或鈣離子載體結(jié)合二甲氨基瞟嶺(6·DMAP)處理。④電激活結(jié)合三磷酸肌醇與 6-
DMAP 處理。
( 六 ) 重構(gòu)胚的培養(yǎng)
經(jīng)融合和激活后的重構(gòu)胚,其培養(yǎng)方法主要有體內(nèi)和體外培養(yǎng)兩種。體內(nèi)培養(yǎng)就是在細(xì)胞核質(zhì)融合后,以瓊脂包埋,移入暫時的中間受體(如兔)的輸卵管內(nèi),培養(yǎng) 4～5d 后,然后回收胚胎進(jìn)行移植。這種方法操作較為復(fù)雜,成本高,不利于商業(yè)性核移植。因此,人們現(xiàn)在一般采用體外培養(yǎng)方法。
( 五 ) 重構(gòu)胚的激活
核移胚的正常發(fā)育有賴于卵母細(xì)胞的充分激活,低的核移胚發(fā)育率可能與卵母細(xì)胞未充激活有關(guān)。在核移植操作中,常用電脈沖誘導(dǎo)供體細(xì)胞與受體卵母細(xì)胞間的融合與激活。這種電激活方法不能引起重組胚產(chǎn)生像受精時精子所誘導(dǎo)的所有反應(yīng)。Wakayama 等（1998)采用電融合后再用化學(xué)試劑(乙醇、鈣離子載體等)激活處理的方法,可明顯提高核移植胚胎的發(fā)育率。
通過近年來的大量研究,下列 4 種方法均能有效地激活各個成熟階段的卵母細(xì)胞 : ①鈣離子載體結(jié)合電激、放線菌酮和細(xì)胞松弛素處理。②乙醇結(jié)合放線菌酮和細(xì)胞松弛素處理。③ 離子霉素或鈣離子載體結(jié)合二甲氨基瞟嶺(6·DMAP)處理。④電激活結(jié)合三磷酸肌醇與 6-
DMAP 處理。
( 六 ) 重構(gòu)胚的培養(yǎng)
經(jīng)融合和激活后的重構(gòu)胚,其培養(yǎng)方法主要有體內(nèi)和體外培養(yǎng)兩種。體內(nèi)培養(yǎng)就是在細(xì)胞核質(zhì)融合后,以瓊脂包埋,移入暫時的中間受體(如兔)的輸卵管內(nèi),培養(yǎng) 4～5d 后,然后回收胚胎進(jìn)行移植。這種方法操作較為復(fù)雜,成本高,不利于商業(yè)性核移植。因此,人們現(xiàn)在一般采用體外培養(yǎng)方法。