( 七 ) 體外受精的質(zhì)量評定
卵母細(xì)胞的體外受精成功與否通常以精子穿透率、原核形成率、受精分裂率和囊胚發(fā)育率來衡量。其中,囊胚發(fā)育率最為可靠,因其可反映體外受精的質(zhì)量。體外受精的具體評定方法以下兩種:
1. 固定染色法
卵母細(xì)胞體外受精后,用 0.1% 的透明質(zhì)酸酶去掉其周圍的卵丘細(xì)胞,然后在醋酸酒精或醋甲醇(1:3)的固定液中固定24～48h,最后用含1%間苯二酚藍(lán)（Lacmoid）均或 1% 的地衣紅(Orcein)的 40% 醋酸溶液染色觀察。如在受精后 8～lOh 固定染色,可以觀察到進(jìn)入卵母細(xì)胞的精子,計算出精子穿透率和多精子受精率。如在受精后18～2Oh 固定染色,可以見到形成的單個、2 個或 2 個以上原核,計算出雙原核形成率(正常受精的比率)。
2. 體外培養(yǎng)
受精正常與否,主要體現(xiàn)在其隨后的胚胎發(fā)育能力。因此,可以通過培養(yǎng)評定其胚胎發(fā)育的潛力。
( 八 ) 受精卵的體外培養(yǎng)和胚胎移植
體外受精完成后,如果不需要繼續(xù)培養(yǎng)觀察,則可直接進(jìn)行胚胎移植。確認(rèn)的體外受精卵,可進(jìn)行輸卵管移植。所產(chǎn)生的后代即為"試管動物"。
如果需要繼續(xù)培養(yǎng)觀察,可采用微滴法和四孔培養(yǎng)板法兩種培養(yǎng)系統(tǒng)。一般培養(yǎng)到囊胚期,再進(jìn)行胚胎移植。常用的實驗動物體外受精卵基礎(chǔ)培養(yǎng)基主要有BMOC-3、TYH、TCM199、Ham's F-10、NUSC23和 MEM 等。